褪黑素（MT）檢測基于競爭性酶聯(lián)免疫吸附測定技術(shù)。抗體被預(yù)先包被在96孔板上。將標(biāo)準(zhǔn)品、測試樣品和生物素結(jié)合試劑添加到孔中并孵育。生物素標(biāo)記的MT與未標(biāo)記的MT之間發(fā)生競爭控制反應(yīng)。然后加入HRP結(jié)合試劑，并孵育整個(gè)培養(yǎng)皿。
在每個(gè)階段使用洗滌緩沖液去除未結(jié)合的結(jié)合物。TMB底物用于定量HRP酶促反應(yīng)。加入TMB基質(zhì)后，只有含有足夠MT的孔才會(huì)產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，然后在加入酸性停止溶液后變?yōu)辄S色。黃色的強(qiáng)度與鍍液中MT的結(jié)合量成反比。用分光光度法在450nm的微孔板讀卡器中測量OD，由此可計(jì)算MT的濃度。
褪黑素（Melatonin，MT）是一種主要由松果體在夜間釋放的激素，長期以來一直與睡眠－覺醒周期的控制有關(guān)。褪黑素屬于吲哚雜環(huán)類化合物，又稱為松果體素、褪黑激素、褪黑色素。
褪黑素合成后，儲(chǔ)存在松果體內(nèi)，交感神經(jīng)興奮支配松果體細(xì)胞釋放褪黑素。褪黑素的分泌具有明顯的晝夜節(jié)律，白天分泌受控制，晚上分泌活躍。MT由松果腺分泌，主要與生物鐘的調(diào)節(jié)、抗氧化、抗衰老、調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)功能，并參與肝性腦病的發(fā)病、調(diào)節(jié)情緒、生育及多種內(nèi)分泌功能。
此分析具有競爭性，因此樣品中的MT濃度與測量的吸光度呈負(fù)相關(guān)。用標(biāo)準(zhǔn)濃度（y軸）和測量的平均吸光度（x軸）的對數(shù)創(chuàng)建一個(gè)圖表。通過標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)應(yīng)用擬合趨勢線。樣品的MT濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線中插值。
