NSE ELISA試劑盒
德國DRG*，貨號：EIA4424
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預(yù)期用途
此試劑盒僅用于研究，不能用于診斷
實驗原理
此試劑盒采用的是酶免法，樣品，標準品，質(zhì)控品和生物素標記的抗NSE抗體在微孔內(nèi)孵育，孵育期間，特異性NSE與包被抗NSE抗體結(jié)合，未結(jié)合的NSE抗原被洗去，酶聯(lián)物加入每孔，孵育，未結(jié)合的酶聯(lián)物被洗去，結(jié)合的酶聯(lián)物的量與樣品中NSE的量成正比，加入底物液后，藍色強度與樣品中的NSE抗原的濃度成正比。
注意事項及預(yù)防措施
1. 試劑盒內(nèi)的成分完整，不同批次的成分不能混用
2. 潛在生物危害的材料：陰性和陽性質(zhì)控基質(zhì)是人血清，標準品血清對HIV，HbsAg和HCV都表現(xiàn)為陰性，但是試劑中會出現(xiàn)此類病毒（HIV/II，HbsAg和HCV）或其他具有感染性的病原體的可能性都不能*被排除。因此，依據(jù)CDC/美國國立衛(wèi)生研究手冊“微生物和生物醫(yī)學實驗室安全”，建議試劑應(yīng)視為2級生物安全處理
貯存及穩(wěn)定性
1. 試劑盒保存在2-8℃，微孔板裝在含有干燥劑的密封袋內(nèi)
2. 試劑盒直至有效期
3. TMB底物液是無色的，如果溶液變藍，則應(yīng)替換，貯存和使用過程中不要將試劑暴露在強光下
試劑盒組成
1. 微孔板，96T，鏈霉親和素包被
2. 酶聯(lián)物和抗體液，11ml，HRP標記的抗NSE抗體和生物素標記的抗體液
3. 標準品，
0.5ml/支，濃度范圍：5,25,50,100,200ug/ml，分裝凍存，標準品在室溫下不穩(wěn)定
4. 高和低質(zhì)控，0.5ml/支，參考值見標簽，分裝凍存，質(zhì)控品在室溫下不穩(wěn)定
5. 樣品稀釋液或零標準品，11ml，
6. TMB底物液，11ml，緩沖液內(nèi)含有過氧化氫和Tetramethylbenzidine
7. 洗滌緩沖濃縮液，10ml，100X，10ml的濃縮液+990ml的去離子水混勻即得工作洗滌緩沖液
8. 終止液，2N 鹽酸
9. 固定板，用于固定板條
實驗所需材料但試劑盒未提供
1. 酶標儀
2. 移液器 體積：25,100ul
3. 1L的洗滌瓶
樣品采集和處理
靜脈穿刺采集全血，自然凝集，室溫下離心分離出血清，貯存于無菌管內(nèi)
延長全血的貯存可能會導(dǎo)致血細胞釋放NSE
如果血清不立即檢測的話，可在2-8℃下保存1天或是-20℃下保存30天
樣品不能反復(fù)凍融，不要將樣品放置在自動除霜冰箱內(nèi)
不要使用脂血和溶血樣品
不建議采用血漿做實驗，因為血小板會釋放NSE
實驗準備
1. 實驗前，將所有樣品，試劑平衡至室溫，混勻
2. 實驗開始前將所有試劑準備好，實驗一旦開始，就要無中斷的完成，以得到zui可靠和一致的結(jié)果
3. 每次取樣都用新的槍頭吸取
實驗步驟
1. 將實驗所需板條固定好，做好樣品標記
2. 吸取25ul的標準品，質(zhì)控品和樣品于相應(yīng)的孔內(nèi)
3. 每孔加入100ul的酶聯(lián)物和抗體液
4. 室溫下孵育60min
5. 棄去孵育液，每孔加入300ul洗滌緩沖液洗板5次
6. 每孔加入100ul的TMB底物液
7. 室溫下孵育30min
8. 每孔加入50ul的終止液，酶標儀讀數(shù)
操作注意事項
1. 洗板，孔內(nèi)水滴要*清除
2. 所有樣品和試劑都要加入至孔底部，漩渦混合或振蕩不要求
3. 吸收值是孵育時間和溫度的函數(shù)，建議試劑和樣品加樣的時間間隔一致，無中斷
4. 基于同樣的原因，樣品數(shù)不超過20個的，標準品設(shè)置雙份檢測
5. 血清樣品中NSE濃度高于200ug/L時，則需進一步稀釋，重新檢測
結(jié)果計算
1. 標準品的濃度為X軸，吸收值為Y軸繪制標準曲線
2. 按以下參考標準曲線獲得樣品NSE值（以下數(shù)據(jù)僅供參考，不能用于本次試驗的結(jié)果計算）
附：采用全自動酶標儀檢測，只需檢測前設(shè)置好酶標儀的相關(guān)參數(shù)，如坐標參數(shù)（線性，半對數(shù)）和計算方式參數(shù)（三次回歸、四參數(shù)或雙對數(shù)曲線方程），即可直接得到結(jié)果
本譯文僅供參考，詳情請以原文為準。
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