干貨!酶聯(lián)診斷試劑的工作原理講解
酶聯(lián)診斷試劑在國內(nèi)有許多種叫法,如:ELISA 檢測試劑盒、 ELISA Kit 、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒、 酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等,比較常見的叫法是 ELISA 檢測試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒等。它是一種敏感性高,特異性強,重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。
酶聯(lián)診斷試劑是酶免疫測定技術中應用較廣的技術,其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體 ( 聚苯乙烯微量反應板 ) 表面,使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行,用洗滌法將液相中的游離成分洗除。常用的酶聯(lián)診斷試劑檢測方法有雙抗體夾心法和間接法,前者用于檢測大分子抗原,后者用于測定特異抗體。
酶聯(lián)診斷試劑的工作原理:
促卵泡素(FSH)是動物腦垂體分泌作用于卵巢卵泡生長、發(fā)育、分化、成熟和排卵的重要繁殖激素。由于是生物大分子,不能透過細胞膜,F(xiàn)SH必須與靶細胞膜上的促卵泡素受體(FSHR)結合,經(jīng)過受體介導將信息傳遞到靶細胞內(nèi),才能發(fā)揮其生物學功能。預先包被的抗體為多克隆抗體,檢測相抗體也為多克隆抗體,經(jīng)生物素標記。樣品和生物素標記抗體先后加入酶標板孔反應后,PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應;經(jīng)過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成黃色。酶聯(lián)診斷試劑顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關。