鐵調素是人體內的一種鐵平衡調節(jié)多肽?;钚远嚯蔫F調素-25主要是在肝臟中產生,通過蛋白質溶解切割前鐵調素的C-端的25個氨基酸所產生的。隨后,N-端的鐵調素-25轉化為更小的多肽(大約20~24個氨基酸),這些多肽活性更低并且在尿液中累積。
鐵調素檢測試劑采用的是競爭酶聯免疫法微孔板上包被了能與生物活性鐵調素-25分子抗原位點特異性結合的單克隆抗體;樣本中的內源性鐵調素與生物素化鐵調素競爭結合包被抗體,溫育后洗去未結合的部分;加入鏈霉親和素-過氧化物酶復合物溫育,洗滌;加入底物液,短時間的孵育,發(fā)生顏色變化反應;樣本中鐵調素濃度與顏色的強度成反比。
檢測步驟
鐵調素檢測試劑每次實驗都應建立標準曲線
1、將實驗所需的板條固定于板架上
2、每孔加100ul的分析緩沖液
3、加20ul的標準品、質控品和樣本于相應的微孔內
4、每孔加入50ul的酶復合物,充分混勻10秒鐘
5、室溫下,溫育60分鐘(300~700rpm)
6、棄去孔內反應液,每孔加300ul的洗滌液洗板4次(手動)或400ul洗板3次(洗板機)
7、每孔加100ul的酶聯物
8、室溫下30分鐘(無需振搖)
9、重復步驟6
10、每孔加100ul的底物液
11、室溫下溫育20分鐘
12、每孔加100ul的終止液
13、鐵調素檢測試劑加入終止液10分鐘內,在酶標儀450±10nm處檢測吸收值