腎上腺素酶聯(lián)診斷試劑盒使用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人甲氧基去甲腎上腺素(MNA)水平。用純化的人甲氧基去甲腎上腺素(MNA)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中順次參加甲氧基去甲腎上腺素(MNA),再與HRP標(biāo)記的甲氧基去甲腎上腺素(MNA)抗體結(jié)合,構(gòu)成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,通過(guò)洗刷后加底物TMB顯色。
TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色。顏色的深淺和樣品中的甲氧基去甲腎上腺素(MNA)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中人甲氧基去甲腎上腺素(MNA)含量。
腎上腺素樣本處理及要求:
1.血清:室溫血液自然凝結(jié)10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。細(xì)心搜集上清,保存過(guò)程中如呈現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。細(xì)心搜集上清,保存過(guò)程中如有沉淀構(gòu)成,應(yīng)該再次離心。
3.尿液:用無(wú)菌管搜集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。細(xì)心搜集上清,保存過(guò)程中如有沉淀構(gòu)成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管搜集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。細(xì)心搜集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)重復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。細(xì)心搜集上清。保存過(guò)程中如有沉淀構(gòu)成,應(yīng)再次離心。
5.組織標(biāo)本:切開(kāi)標(biāo)本后,稱(chēng)取重量。參加一定量的PBS,PH7.4。用液氮敏捷冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本消融后依然保持2-8℃的溫度。參加一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。細(xì)心搜集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能立刻進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免重復(fù)凍融.
7.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。