不少人可能會好奇:為什么核酸檢測不能直接用棉簽蘸唾液來唾液檢測呢?原因有兩點: 1.唾液里的病毒量少 病毒一般是定植在呼吸道里,隨著呼吸道分泌物向外排出的,因此越靠近咽喉里面,病毒會分布得越多。唾液中的病毒比咽部表皮上要少,檢測的敏感度可能會降低。
2.唾液需要經過液化處理 唾液本身比較黏稠,不能直接拿來檢測,需要先進行液化處理。全國每天有大量核酸樣本要檢測,如果每份都要液化,無疑就會大大增加檢測時間。
目前唾液的檢測的樣本采集比較方便,處理也比較簡單,可檢測的用途也越來越廣了。本文介紹的唾液鐵調素檢測試劑盒采用的是ELISA方法,該方法操作簡單方便,擁有靈敏度高特異性強的特點,檢測時間短,檢測結果準確,目前ELISA方法已經在普遍運用。
檢測原理
唾液鐵調素檢測試劑盒采用的競爭法。微量滴定孔用針對鐵調素分子抗原位點的單克?。ㄐ∈螅┛贵w包被。患者樣品中的內源性鐵調素與鐵調素-生物素結合物(酶結合物)競爭與被包被抗體的結合。溫育后,洗滌微量滴定板以終止競爭反應。
在隨后的溫育中,結合的生物素分子用鏈霉親和素過氧化物酶(酶復合物)檢測。溫育后,將板再次洗滌。添加底物溶液后,顯色的強度與患者樣品中鐵調素的濃度成反比。
檢測步驟
每次運行必須包含一條標準曲線。
1、在框架固定器中固定所需數(shù)量的微量滴定孔。
2、用新的一次性吸頭分配100 ?L的每個標準品,質控品和樣品(上清液)到適當?shù)目字小?/span>
3、在每個孔中分配100 ?L酶聯(lián)物。*混合10秒鐘。在此步驟中進行充分混合非常重要。
4、在室溫下孵育60分鐘。
5、輕搖孔中的內容物。每孔用400 ?L稀釋的洗滌溶液沖洗孔4次(如果使用了平板清洗機)-或-每孔用300 ?L稀釋的洗滌溶液沖洗孔4次以進行手動洗滌。在吸收紙上劇烈打孔以去除殘留的液滴。重要的提示:正確執(zhí)行洗滌程序會明顯影響該測定的靈敏度和精確度!
6、將100 ?L酶復合物分配到每個孔中。
7、在室溫下孵育30分鐘。
8、輕搖孔中的內容物。每孔用400 ?L稀釋的洗滌溶液沖洗孔4次(如果使用了平板清洗機)-或-每孔用300 ?L稀釋的洗滌溶液沖洗孔4次以進行手動洗滌。在吸收紙上劇烈打孔以去除殘留的液滴。
9、向每個孔中添加100 ?L底物溶液。
10、在室溫下孵育15分鐘。
11、通過向每個孔中添加100 ?L終止液來終止酶促反應。
12、用微量滴定板讀數(shù)器測定每個孔在450±10 nm處的吸光度(OD)。建議在添加終止液后10分鐘內讀取孔。