5-羥色胺(serotonin)檢測試劑盒
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱:5-羥色胺檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
英文名稱:Serotonin ELISA
【產(chǎn)品規(guī)格】
96T
【預期用途】
5-羥色胺(serotonin)檢測試劑盒可用于人血清、血漿、血小板和尿液中五羥色胺的體外定量檢測。進一步的研究表明:此試劑盒還可用于組織勻漿和細胞培養(yǎng)上清液的研究
【前言簡介】
五羥色胺是色氨酸代謝的中間產(chǎn)物,它主要存在于腸嗜鉻細胞、血清素激活的神經(jīng)元和血小板中,它已被確定為是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一種神經(jīng)遞質。循環(huán)血液中的五羥色胺幾乎都集中于血小板內。循環(huán)五羥色胺濃度的變化可反映出人體的一些病理變化,這些病理變化包括:慢性肌緊張性頭痛、精神分裂癥、高血壓、舞蹈癥、杜氏肌萎癥和早期急性闌尾炎。血清五羥色胺的檢測對類癌綜合征的檢測具有重要臨床意義。人們預計:在不久的將來,人們對血小板內五羥色胺的研究興趣(包括五羥胺的吸收及釋放動力學研究)應該會不斷增長。
【檢測原理】
樣品準備(將五羥色胺轉變?yōu)?/span>N-乙酰五羥色胺)是樣品稀釋的一部分,將每一份樣品分別與?;噭┮黄饻赜涂梢缘玫锦;奈辶u色胺。此實驗采用的是競爭性ELISA的原理,生物素標記的和非生物素標記的抗原競爭性結合到一定數(shù)量的抗體結合位點上。最后,結合到抗體上的生物素標記抗原的量與樣品中被分析物的濃度成反比。當反應系統(tǒng)達到平衡后,洗板除去未結合的生物素標記抗原,用抗生物素堿性磷酸酶做標記、對硝基苯磷酸做底物來檢測結合到抗體上的生物素標記抗原的量。用已知標準品做一條標準曲線,將未知樣品的酶活性在標準曲線上進行定標就可以得到未知樣品中五羥色胺的濃度。
【儲存條件】
試劑盒和運輸環(huán)境和儲存環(huán)境溫度為2-8℃,避免熱源或太陽直射。樣品的儲存與穩(wěn)定性及試劑的準備將在相關章節(jié)中闡述。打開了的的試劑盒在有效期內穩(wěn)定,前提是要將試劑盒用袋子密封并儲存于2-8℃下。
檢測步驟
簡短操作步驟(僅供樣品A使用,不能應用于血漿)
1 | 將標準品、?;馁|控品和?;臉悠犯?/span>50µl加入到相應的微孔中。 |
2 | 在每一微孔中加入50µl五羥色胺生物素。 |
3 | 在每一微孔中加入50µl五羥色胺抗血清。 |
4 | 蓋板,室溫(18-25℃)下振蕩(500rpm)溫育90min。 |
5 | 移去封板紙,棄取孔內反應液,每孔用250µl稀釋好的洗滌液洗板3次,吸水紙上拍干以除去殘余液體。 |
6 | 在每一微孔中加入150µl臨時準備好的酶聯(lián)物。 |
7 | 蓋板,室溫(18-25℃)下振蕩(500rpm)溫育60min。 |
8 | 移去封板紙,棄取孔內反應液,每孔用250µl稀釋好的洗滌液洗板3次,吸水紙上拍干以除去殘余液體。 |
9 | 如果有條件的話,可以用8道移液器加底物液和終止液。加底物液和終止液時,每孔間的時間間隔應當相同。使用主動置換型移液器并避免氣泡產(chǎn)生。 |
10 | 在每一微孔中加入200µl臨時配置好的PNPP底物液。 |
11 | 室溫(18-25℃)下振蕩(500rpm)溫育60min。 |
12 | 在每一微孔中加入50µl PNPP終止液以終止底物反應,輕輕振板以使溶液混合均勻。 |
13 | 加終止液后60min內405nm處讀取OD值。 |
可選操作步驟(溫育一整夜,樣品A和樣品B均適用)
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